什么(me)是多肽的純度(du)?
多肽的純(chun)度是指HPLC方法(fa)在214nm處檢(jian)測到的(de)(de)目標多(duo)肽的(de)(de)含(han)量(214nm是肽鏈的(de)(de)吸收波長),紫(zi)外分光光度計檢(jian)測不到水和殘留(liu)的(de)(de)鹽不。可發現其他的(de)(de)雜(za)質(zhi)包括:缺失序(xu)列(lie)(缺失了(le)一個或多(duo)個氨基酸殘基的(de)(de)靶序(xu)列(lie)),截斷序(xu)列(lie)(加帽過程中產生(sheng)的(de)(de)序(xu)列(lie))脫保護不完全(quan)序(xu)列(lie)(產生(sheng)于整個合成過程或*后的裂解(jie)過程)。
多(duo)肽純化不涉及(ji)水和(he)鹽(yan)。HPLC純化會(hui)產(chan)生少量的(de)TFA,如(ru):游離的(de)氨基末端和其他(ta)側鏈如(ru)Arg、Lys、His都可生成少量TFA雜質。通常交付的多(duo)肽多(duo)含有微量TFA和殘留水。即使處(chu)于凍干狀態,水也會因共價(jia)結合的能力不同(tong)而不同(tong)程度地存在著。
在多肽中還存在哪些其(qi)他物質(雜質)?
雜(za)質
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純(chun)化前的多肽
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純(chun)化(hua)后的(de)多肽(HPLC)
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缺失(shi)序列1
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截斷(duan)序列(lie)2
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脫保護不完全序列3
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裂解過(guo)程中(zhong)被修(xiu)改的序列4
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DTT (dithiothreitol,二巰(qiu)基蘇糖醇(chun))
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TFA (trifluoroacetic acid,三氟乙酸)
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Acetic acid(醋酸)
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某個氨基酸(suan)發生了副反應的多肽(tai),如(ru)脯氨酸(suan)異構(gou)化等。
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純化(hua)前(qian)的(de)多肽(tai)(tai)(tai)(tai)中包(bao)含的(de)雜質包(bao)括多肽(tai)(tai)(tai)(tai)和(he)非多肽(tai)(tai)(tai)(tai)物質, 純化(hua)后的(de)多肽(tai)(tai)(tai)(tai)中包(bao)含的(de)雜質除(chu)了TFA鹽,大多數為序(xu)列被修改的(de)多肽(tai)(tai)(tai)(tai)。
缺失了一(yi)個(ge)或多個(ge)氨基(ji)酸(suan)殘基(ji)的靶序列(lie)
為避免缺失序(xu)列的產生而(er)進(jin)行的加帽操作(zuo),截斷序(xu)列即產生于加帽過程中(zhong)
產生于整個(ge)合成過(guo)程或*后的(de)裂解過(guo)程
保(bao)護基重新附(fu)著在多肽的其他位置